Ampicilin
®Ó pha thuèc tiªm lµ bét kÕt tinh v« khuÈn cña ampicilin natri ®ãng trong lä
thuû tinh nót kÝn. ChØ pha víi “níc v« khuÈn ®Ó tiªm” ngay tríc khi dïng.
ChÕ phÈm ph¶i ®¹t c¸c yªu cÇu
quy ®Þnh trong chuyªn luËn chung vÒ “Thuèc tiªm, thuèc tiªm truyÒn” (Phô lôc
1.19) vµ c¸c yªu cÇu sau ®©y:
Hµm lîng ampicilin, C16H19N3O4S
, ph¶i ®¹t tõ 95,0 ®Õn 105,0% so
víi hµm lîng ghi trªn nh·n.
Bét kÕt tinh tr¾ng hoÆc gÇn
tr¾ng, tan trong níc.
§Þnh tÝnh
Cã thÓ chän mét trong hai nhãm
®Þnh tÝnh sau:
Nhãm
I: C¸c phÐp thö A vµ C
Nhãm
II: C¸c phÐp thö B, C vµ D
A.
Phæ hång ngo¹i (Phô lôc 4.2) cña chÕ phÈm ph¶i phï hîp víi phæ hång ngo¹i cña
ampicilin natri chuÈn.
NÕu
phæ kh«ng phï hîp th× thùc hiÖn ph¬ng ph¸p sau: Hoµ tan mét lîng chÕ phÈm
t¬ng øng víi 0,25 g ampicilin trong 5 ml níc, thªm 0,5 ml dung dÞch acid acetic 2 M(TT), trén ®Òu vµ ®Ó yªn 10 phót trong
níc l¹nh. Läc qua phÔu thuû tinh xèp sè 3, röa c¾n víi 2 - 3 ml hçn hîp 9 thÓ tÝch
aceton (TT) vµ 1 thÓ tÝch níc, lµm kh« c¾n ë 60 oC
trong 30 phót vµ ®o phæ hång ngo¹i. Phæ hång ngo¹i cña c¾n ph¶i phï hîp víi phæ
chuÈn cña ampicilin trihydrat.
B.
Trong phÇn ®Þnh lîng, pic chÝnh trªn s¾c ký ®é cña dung dÞch thö ph¶i cã cïng
thêi gian lu víi pic chÝnh trªn s¾c ký ®å cña dung dÞch chuÈn.
C.
ChÕ phÈm ph¶i cã ph¶n øng ®Æc trng cña muèi natri ( Phô lôc 8.1).
D.
Ph¬ng ph¸p s¾c ký líp máng (Phô lôc 5.4).
B¶n máng: Silica gel GF254 .
Dung m«i khai triÓn: Hçn hîp dung
dÞch amoni acetat 15,4% (TT) ®· ®îc ®iÒu chØnh tíi pH 5,0 b»ng acid acetic khan (TT) vµ aceton (TT)
(90 : 10).
Dung dÞch thö: Hoµ tan mét lîng chÕ phÈm t¬ng øng víi 25 mg
ampicilin natri trong 10 ml dung dÞch
natri hydrocarbonat 4,2% (TT).
Dung dÞch ®èi chiÕu (1): Hoµ tan 25 mg ampicilin trihydrat chuÈn trong 10 ml dung dÞch natri hydrocarbonat 4,2% (TT).
Dung dÞch ®èi chiÕu (2): Hoµ tan 25 mg ampicilin trihydrat chuÈn vµ 25 mg
amoxicilin trihydrat chuÈn trong 10 ml
dung dÞch natri hydrocarbonat 4,2% (TT).
C¸ch tiÕn hµnh: ChÊm riªng biÖt lªn b¶n máng 2 ml mçi dung dÞch trªn. TriÓn khai s¾c ký trong b×nh b·o
hoµ h¬i dung m«i ®Õn khi dung m«i ®i ®îc kho¶ng 15 cm. LÊy b¶n máng ®Ó kh«
ngoµi kh«ng khÝ, ®Æt b¶n máng vµo b×nh cã
h¬i iod ®Õn khi xuÊt hiÖn c¸c vÕt, quan s¸t díi ¸nh s¸ng ban ngµy.
Trªn
s¾c ký ®å thu ®îc, vÕt chÝnh cña dung dÞch thö vµ dung dÞch ®èi chiÕu (1) ph¶i
gièng nhau vÒ h×nh d¹ng, mµu s¾c vµ gi¸ trÞ Rf . PhÐp thö chØ cã gi¸
trÞ khi dung dÞch ®èi chiÕu (2) cho 2 vÕt t¸ch râ rµng.
§é trong vµ mµu s¾c cña dung
dÞch
Hoµ
tan 1,0 g chÕ phÈm trong 10 ml dung dÞch
acid hydrocloric 1 M (TT),
l¾c kü (dung dÞch A). Hßa tan 1,0 g chÕ phÈm trong níc võa ®ñ 10 ml
(dung dÞch B).
C¶ hai dung dÞch ®Òu ph¶i trong. NÕu
dung dÞch ®ôc th× kh«ng ®îc ®ôc h¬n dung dÞch chuÈn ®èi chiÕu II (Phô lôc 9.2).
§é hÊp thô ¸nh
s¸ng cña dung dÞch B ë bíc sãng 430 nm kh«ng qu¸ 0,15.
Dung
dÞch chÕ phÈm 10% trong níc kh«ng cã
carbon dioxyd (TT) cã pH tõ 8,0
®Õn 10,0. §o trong vßng 10 phót sau khi pha dung dÞch (Phô lôc 6.2).
Kh«ng
qu¸ 2% ( Phô lôc 10.3). Dïng 0,3 g chÕ phÈm.
Hoµ
tan kho¶ng 0,100 g chÕ phÈm trong 20 ml níc, thªm 0,5 ml dung dÞch acid hydrocloric 0,1 M (TT) vµ 25,0 ml dung dÞch iod 0,02 N (C§). §Þnh lîng
ngay b»ng dung dÞch natri thiosulfat 0,02
N (C§), dïng dung dÞch hå tinh bét (TT)
lµm chØ thÞ.
Song
song lµm mÉu tr¾ng trong cïng ®iÒu kiÖn. HiÖu sè gi÷a hai lÇn chuÈn ®é biÓu thÞ
lîng chÊt hÊp thô iod cã mÆt.
1
ml dung dÞch natri thiosulfat 0,02 N (C§) t¬ng øng víi 0,7392 mg chÊt hÊp
thô iod. TÝnh tû lÖ phÇn tr¨m chÊt hÊp thô iod trong mÉu thö. Tæng tû lÖ phÇn
tr¨m chÊt hÊp thô iod vµ tû lÖ phÇn tr¨m ampicilin natri (c¶ hai lo¹i ®Òu tÝnh
theo chÊt khan) kh«ng ®îc Ýt h¬n 97,5%.
1 mg C16H19N3O4S
®îc x¸c ®Þnh ë môc ®Þnh lîng t¬ng ®¬ng víi 1,063 mg ampicilin natri, C16H18N3NaO4S.
TiÕn hµnh thö theo chuyªn luËn
“ PhÐp thö néi ®éc tè vi khuÈn” ( Phô lôc 13.2).
Hoµ tan mét lîng chÕ phÈm
trong níc BET(TT) ®Ó thu ®îc dung
dÞch cã nång ®é ampicilin 9,5 mg/ml (dung dÞch A). Nång ®é giíi h¹n néi ®éc tè
cña dung dÞch A lµ 1,5 IU/ml. Gi¸ trÞ ®é pha lo·ng tèi ®a cña dung dÞch A ®îc
tÝnh tõ ®é nh¹y cña thuèc thö Lysat
dïng trong phÐp thö .
§Þnh lîng
TiÕn hµnh b»ng ph¬ng ph¸p s¾c
ký láng (Phô lôc 5.3).
Pha
®éng: Níc- acetonitril- dung dÞch kali dihydrophosphat 1 M- dung dÞch acid
acetic 1 M (909 : 80 : 10 : 1).
Dung
dÞch thö: c©n chÝnh x¸c mét lîng chÕ phÈm t¬ng øng víi kho¶ng 50 mg ampicilin
vµo b×nh ®Þnh møc 50 ml, thªm 30 ml pha ®éng, l¾c cho tan, pha lo·ng b»ng pha
®éng ®Õn v¹ch, l¾c ®Òu vµ läc. Hót 10,0 ml dÞch läc, pha lo·ng thµnh 50,0 ml
víi pha ®éng, läc.
Dung
dÞch chuÈn: c©n chÝnh x¸c kho¶ng 50 mg ampicilin chuÈn vµo b×nh ®Þnh møc 50 ml,
thªm 30 ml pha ®éng, l¾c cho tan, pha lo·ng b»ng pha ®éng ®Õn v¹ch, l¾c ®Òu vµ
läc. Hót 10,0 ml dÞch läc, pha lo·ng thµnh 50,0 ml víi pha ®éng, läc.
Dung
dÞch ph©n gi¶i: Dung dÞch cã nång ®é ampicilin chuÈn 200 mg/ ml vµ cephradin
chuÈn 20 mg/ ml pha trong pha
®éng.
§iÒu
kiÖn s¾c ký:
Cét
thÐp kh«ng gØ (25 cm ´
4,6 mm) ®îc nhåi pha tÜnh C (5 mm) (cét Hypersil ODS lµ thÝch hîp).
Tèc ®é dßng: 1,2 ml/phót.
Detector quang phæ tö ngo¹i
®Æt ë bíc sãng 254 nm.
ThÓ tÝch tiªm: 20 ml.
C¸ch
tiÕn hµnh:
KiÓm tra kh¶ n¨ng thÝch hîp
cña hÖ thèng s¾c ký: Tiªm dung dÞch ph©n gi¶i vµ ®iÒu chØnh ®é nh¹y sao cho
chiÒu cao cña c¸c pic Ýt nhÊt còng b»ng nöa thang ®o. Thö nghiÖm chØ cã gi¸ trÞ
khi hÖ sè ph©n gi¶i gi÷a 2 pic ampicilin vµ cephadrin kh«ng nhá h¬n 3,0. (NÕu
cÇn), cã thÓ ®iÒu chØnh thµnh phÇn pha ®éng ®Ó ®¹t ®iÒu kiÖn trªn). Thö nghiÖm chØ
cã gi¸ trÞ khi ®é lÖch chuÈn t¬ng ®èi cña diÖn tÝch pic cña 6 lÇn tiªm dung
dÞch chuÈn nhá h¬n 2,0%.
Tiªm lÇn lît dung dÞch chuÈn
vµ dung dÞch thö.
TÝnh hµm lîng ampicilin, C16H19N3O4S
, trong mét ®¬n vÞ chÕ phÈm theo khèi lîng trung b×nh tõ diÖn
tÝch pic trªn s¾c ký ®å cña dung dÞch chuÈn, dung dÞch thö, vµ hµm lîng C16H19N3O4S
trong ampicilin chuÈn.
§Ó n¬i kh« m¸t, nhiÖt ®é kh«ng
qu¸ 25oC.
Lo¹i
thuèc
Kh¸ng sinh nhãm beta - lactam
500
mg, 1000 mg.